日前液体乳产品中发现黄曲霉毒素M1超标，引发公众广泛关注。黄曲霉毒素检测常见的方法为经免疫亲和柱净化后，采用HPLC（高效液相色谱法）、TLC（薄层层析法）、LC-MS/MS（液质联用）检测以及ELISA（酶联免疫）法。其中ELISA法使用较为普遍，但因其定量不准确，只能作为阳性样品的初筛工具。LC-MS/MS检测因其具有灵敏度高、快速、准确的特点，广泛应用于食品安全检测。

　　AB SCIEX一直致力于为用户提供全方位的解决方案，在事件爆发的第一时间建立高效液相串联质谱法测定黄曲霉毒素的整体解决方案。

　　1.样品前处理方法

　　适用于乳和乳制品中黄曲霉毒素的测定。

　　⑴提取方法：

　　①乳：

　　称取50g（精确至0.01g）混匀的试样，置于50mL具塞离心管中，在水浴中加热到35℃～37℃。在6000转/分钟下离心15min。收集全部上清液，供净化用。

　　②发酵乳（包括固体状、半固体状和带果肉型）：

　　称取50g（精确至0.01g）混匀的试样，用0.5mol/L的氢氧化钠溶液在酸度计指示下调pH值至7.4，在9500转/分钟下匀浆5min，在水浴中加热到35℃～37℃。在6000转/分钟下离心15min。收集全部上清液，供净化用。

　　③乳粉和粉状婴幼儿配方食品：

　　称取10g（精确至0.01g）试样，置于250mL烧杯中。将50mL已预热到50℃的水加入到乳粉中，用玻璃棒将其混合均匀。如果乳粉仍未完全溶解，将烧杯置于50℃的水浴中放置30min。溶解后冷却至20℃，移入100mL容量瓶中，用少量的水分次洗涤烧杯，洗涤液一并移入容量瓶中，用水定容至刻度，摇匀后分别移至两个50mL离心管中，在6000转/分钟下离心15min，混合上清液，用移液管移取50mL上清液供净化处理用。

　　④干酪：

　　称取经切细、过10目圆孔筛混匀的试样5g（精确至0.01g），置于50mL离心管中，加2mL水和30mL甲醇，在9500转/分钟下匀浆5min，超声提取30min，在6000转/分钟下离心15min。收集上清液并移入250mL分液漏斗中。在分液漏斗中加入30mL石油醚，振摇2min，待分层后，将下层移于50mL烧杯中，弃去石油醚层。重复用石油醚提取2次。将下层溶液移到100mL圆底烧瓶中，减压浓缩至约2mL，浓缩液倒入离心管中，烧瓶用乙腈-水溶液（1 4）5mL分2次洗涤，洗涤液一并倒入50mL离心管中，加水稀释至约50mL，在6000转/分钟下离心5min，上清液供净化处理。

　　⑤奶油：

　　称取5g（精确至0.01g）试样，置于50mL烧杯中，用20mL石油醚将其溶解并移于250mL具塞锥形瓶中。加20mL水和30mL甲醇，振荡30min后，将全部液体移于分液漏斗中，待分层后，将下层溶液全部移到100mL圆底烧瓶中，在旋转蒸发仪中减压浓缩至约5mL，加水稀释至约50mL，供净化处理。

　　⑵净化方法

　　①免疫亲和柱的准备：

　　将一次性的50mL注射器筒与亲和柱上顶部相串联，再将亲和柱与固相萃取装置连接起来。

　　②试样的纯化：

　　将上述样品提取液移至50mL注射器筒中，调节固相萃取装置的真空系统，控制试样以2mL/min～3mL/min稳定的流速过柱。取下50mL的注射器筒，装上10mL注射器筒。注射器筒内加入水，以稳定的流速洗柱，然后，抽干亲和柱。脱开真空系统，在亲和柱下部放入10mL刻度试管，上部装上另一个10mL注射器筒，加入4mL乙腈，洗脱待测物，洗脱液收集在刻度试管中中，洗脱时间不少于60秒。然后用氮气缓缓地在30℃下将洗脱液蒸发至近干（如果蒸发至干，会损失待测物），用乙腈-水溶液（1 9）稀释至1mL。

　　2.LC-MS/MS仪器条件

　　①液相色谱参数：

　　色谱柱：PhenomenexLunaPFP（2）3µm，100Å，50×2mm

　　柱温：28℃

　　流动相：含0.1%甲酸，甲醇/5mM乙酸铵水溶液（60:40）

　　流速：0.4mL/min

　　进样量：10µL

　　运行时间：3min

　　②质谱参数：

　　以下参数以API3200为例，具体参数和检测灵敏度视仪器不同而有差异。

　　离子源参数：

　　CUR： 20 psi

　　IS： 5500 V

　　TEM： 425°C

　　GS1： 30 psi

　　GS2： 60 psi

　　Ihe： On

　　CAD： High

　　实验结果

　　黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2和M1提取离子流图如下：

　　结论

　　AB SCIEX提供的全方位解决方案，可同时测定乳及乳制品中B1、B2、G1、G2和M1共5种黄曲霉毒素。

　　AB SCIEX公司提供免费下载的用于测定黄曲霉毒素的iMethod，在Cliquid软件中安装后可直接使用。