利用SU5000和Gatan 3View 2XP 对老鼠肝细胞截面的高分辨截面观测

图1. 老鼠肝细胞高分辨BSE图像

仪器：热场发射SU5000 ， Gatan 3View 2XP

SEM（加速电压: 2 kV, 真空模式: 高真空）

3View（图像大小: 16k×16k, 像素点尺寸: 2 nm/pixel, 观测区域: 33 mm×33 mm）

图. 1 为老鼠肝细胞整体染色并树脂包埋后的高分辨截面观测结果，图中可观测到整个细胞及细胞器的分布。右图是左图黄框内区域数字放大5倍后的结果，图中可明显观测到细胞核 (N) 及其附近的内质网(ER) ，线粒体(M) 及嵴(←), 高尔基体(G), 糖原颗粒 (▲)分布。

利用SU5000和Gatan 3View 2XP 对老鼠肝细胞超薄切片观测及三维重构

(a) 超薄切片观测图像  (b)三维重构结果（长为10 μm的正方体）(c) 三维重构 (XY 面, YZ 面，XZ 面）

图2. 老鼠肝细胞连续切片及三维重构结果

图. 2 为老鼠肝细胞染色树脂包埋后连续切片（a）及三位重构（b）（c）结果。 三维重构图像可以通过300张截面图像堆叠计算得到。 由于热场发射电子枪束流的稳定性，可连续长时间地拍摄获取300多张的图像。通过三维重构的结果可直观地看到细胞尺寸结构及其细胞器的三维分布，能更多地获取生物细胞的信息。

利用SU5000和Gatan 3View 2XP 对老鼠肝细胞三维重构结果分析

图3. (a) 连续截面BSE图像堆叠图像结果 (b) 线粒体及细胞核体分布 (红色为线粒体，绿色为细胞核)

（c）线粒体的尺寸分布直方图

通过连续切片获得的三维重构结果，可选择性的得到所需信息，如线粒体的分布，结构，尺寸数目的面分布及体分布等。 图3为三维堆叠图及后续分析出的线路体（红色）及细胞核（绿色）的分布图。可直观地观测到线粒体的形状，结构及分布。 图2显示的是线粒体的尺寸分布直方图,可通过软件直接得到线粒体的体分布和面分布，进而分析细胞内线粒体的数目及分布。

仪器： 热场发射SU5000

Gatan 3View 2XP

三维重构： Image Pro Premier 3D

(Media Cybernetics Inc.)

SEM条件：加速电压　2 kV

真空模式　高真空

3View条件：图像尺寸　8k×8k

像素尺寸　4.4 nm/pixel

观测区域　36 mm×36 mm

切片厚度　50 nm

切片数　  300