食品中添加剂检测前处理过程十分繁琐，之前介绍过食品中维生素ADE的方法，通过双三元液相全自动在线二维分析技术，可以省去繁重的离线制备过程，分析效率得以飞速提升^[1]。此次赛默飞针对低含量VB12添加的饲料检测，同样轻松应对难题，解放双手，工作效率倍增。

饲料维生素检测难点

现行有效的国标方法主要有“添加离子对试剂的反相高效液相色谱分析方法”以及“使用氨基柱的色谱分析方法”^{[2] [3]},可前者见VB12的色谱保留存在难点，离子对色谱法平衡时间较长；后者氨基柱法需特别注意柱子的使用范围，对于习惯使用普通C18柱分析的用户而言不太适应。

国标对于低添加VB12预混合饲料的指导（样品溶液中维生素B₁₂浓度小于2μg/ml），需要进行离线的样品富集、净化步骤，常用手段包括固相萃取以及免疫亲和法^[3][4]，首先需要进行一次富集处理，多批次样品送检过程繁琐且时间较长。

对症下药——双三元液相在线富集、除杂

使用赛默飞双三元液相系统，样品只需简单超声过滤即可大体积直接上样富集、除杂、分析，整个过程全部实现自动化。下面是双三元液相在线富集、除杂、分析的自动化工作流程：

样品净化

转移 / 分离

分离 / 再生

赛默飞双三元特色方案介绍

赛默飞基于双三元液相平台开发了维生素B₁₂全自动在线样品富集测定方法，样品超声后过滤即可直接上样测定。

相比采用离子对色谱冗长的平衡时间，该法具有分析时间短，峰形良好的优点。

Thermo Scientific™ UltiMate™ 3000

双三元系统

双三元系统测试结果^[5]：

VB12标准溶液色谱图

VB12实际样品溶液色谱图

本方法重现性良好，连续6次进样重现性RSD=0.48%，且通过色谱柱优化，相对于国标方法而言，峰形更加良好（参见下图国标方法色谱图），且自动化程度高，大大提升了分析效率。

维生索B₁₂标准色谱图（氨基柱)见图A.1；维生素B₁₂标准色谱图（C₁₈柱）见图A.2。

图A.1 10μg/mL 维生索B₁₂标准溶液色谱图（氨基柱）

图A.2 10μg/mL 维生索B₁₂标准溶液色谱图（C₁₈柱）

参考文献：

【1】在线二维液相色谱法同时测定婴幼儿和成人配方营养品中的维生素A、D3和E （张艳海，其布勒哈斯等，色谱， Vol.33 No.3 291-297）

【2】GBT9841-2006: 饲料添加剂维生素B12粉剂

【3】GBT17819-2017:添加剂预混合饲料中维生素B12的测定高效液相色谱法

【4】GBT5009.217-2008:保健食品中维生素B12的测定

【5】AN_19026_HPLC_食品_Ultimate 3000 在线净化富集法测定预混合饲料中Vitamin B12

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